page_banner

Yangiliklar

Hujayra madaniyati bo'yicha tez-tez so'raladigan savollar

1. Agar muzlatilgan hujayralar naychasini olsam, uni saqlash uchun to'g'ridan-to'g'ri suyuq azotga solsam bo'ladimi?

Ko'p hollarda quruq muzda (-80 ° C) tashilgan hujayralar suyuq azotga qaytarilishi va keyin tezda eritilishi mumkin.Biroq, bunday davolanishdan keyin hujayra hayotiyligi kamayishi mumkin.Ba'zi sezgir hujayralar uchun bu hujayra tiklanishini qiyinlashtirishi mumkin.Bu hodisa haroratning o'zgarishi natijasida hujayralar ichidagi muz kristallari tuzilishining o'zgarishi bilan bog'liq deb hisoblanadi.Shuning uchun hujayralarni olingandan so'ng iloji boricha tezroq eritib, ekish tavsiya etiladi.Saqlash vaqtini -80 ° C da qisqartiring.Bu harorat faqat tashish uchun ishlatiladi.

Tez-tez so'raladigan hujayra madaniyati 1
Tez-tez so'raladigan hujayra madaniyati 2
Tez-tez so'raladigan hujayra madaniyati 4
Tez-tez so'raladigan hujayra madaniyati 3

2. Qayta tiklash uchun suyuq azotdan hujayralarni olib tashlashda qanday xavfsizlik choralarini ko'rish kerak?

Suyuq azotdagi hujayra kriotubalari to'liq yopilmagan va suyuq azot oqib chiqadigan bo'lsa, eritish paytida uning harorati keskin ko'tarilsa, portlash sodir bo'lishi mumkin.Shuning uchun hujayralarni suyuq azotdan olib tashlashda ko'zoynak va himoya qo'lqop kiyish tavsiya etiladi.Reanimatsiya uchun muzlatish trubkasini 1-2 daqiqa ichida muzlatish eritmasini to'liq eritish uchun 37 ° C suv hammomida doimiy ravishda silkitib turish kerak.Shundan so'ng, probirkaning tashqi qismini spirtli salfetka bilan artib oling, so'ngra uni o'ta toza stolga olib boring va hujayralarni 10 ml madaniy muhit qo'shilgan santrifuga trubasiga o'tkazing, 1000 rpm tezlikda 5-10 daqiqa davomida santrifüj qiling, so'ngra uni tashlang. supernatant, tegishli miqdordagi madaniyat muhitini qo'shing va kultura kolbasini inkubatsiya qiling va 5% CO2 inkubatorida inkubatsiya qiling.

3. Nima uchun hujayralar suyuq fazada emas, balki suyuq azot tankining bug 'fazasida saqlanishi kerak?

Suyuq azotning gaz fazasida saqlanadigan hujayralar jonlanish ehtimoli ko'proq.Suyuq azotning suyuq fazasida, agar liyofilizatsiya naychalari to'g'ri yopilmagan bo'lsa yoki oqish bo'lsa, hujayralar va suyuq azot o'rtasidagi to'g'ridan-to'g'ri aloqa eritishdan keyin hujayralarning hayotiyligini buzishi mumkin.

4. Suspenziya hujayralari uchun kultura muhitini qanday o'zgartirish mumkin?

Suspenziya hujayralarini etishtirish oddiygina yangi muhitni qo'shish (agar bo'sh joy bo'lsa) yoki hujayralarni eski muhitdan sentrifugalash (100 xg 5 minut) orqali ajratish va keyin cho'kma hujayralarini yangi muhitda qayta suspenziya qilish orqali amalga oshirilishi mumkin.Biroq, ko'pchilik suspenziyali hujayralar uchun oddiygina vositani qo'shish yaxshiroq usuldir.Qanday bo'lmasin, hujayralar eng katta to'yinganlik zichligiga yetguncha muhitni yangilash kerak.Hujayralarning to'yinganlik zichligi hujayra chizig'i va madaniyat sharoitlariga (dam olish yoki aralashtirish, kislorod bilan ta'minlash darajasi va boshqalar) qarab 3 x 10 5 va 2 x 10 6 orasida o'zgarib turadi.Hujayralarning logarifmik o'sishini ta'minlash uchun ozuqa moddalarining etarli darajada tiklanishiga imkon berish uchun hujayralar pastroq hujayra konsentratsiyasiga suyultirilishi kerak.Agar muhit hujayra zichligini kamaytirmasdan oddiygina o'zgartirilsa, hujayralar muhitni tezda yo'q qiladi va o'ladi.Agar hujayralar eng kichik zichlikdan pastroqda suyultirilsa, ular kechikish bosqichiga kiradi va juda sekin o'sadi yoki o'ladi.Har bir suspenziya hujayra chizig'i turli xil to'yinganlik zichligi va o'tish oralig'iga ega, shuning uchun kunlik hujayralar soni suspenziya hujayra chiziqlarini * kuzatishning usuli hisoblanadi.

5. Hujayra kulturasi uchun tavsiya etilgan CO2 darajasi qanday?

Hujayra madaniyati tizimlarida CO2 darajasi 0,03% dan 40% gacha bo'lsa-da (odatda atmosferada taxminan 0,03% CO2), havoga CO2 qo'shilmasligi yoki CO2 konsentratsiyasining 5% dan 10% gacha bo'lishi juda keng tarqalgan.Gaz fazasidagi CO2 darajasi bilan muvozanatlash uchun muhitdagi natriy bikarbonat konsentratsiyasini sozlash muhimdir.Hujayralar CO2 hosil qiladi va o'sishi va yashashi uchun oz miqdorda karbonat kislotasini talab qiladi.Agar CO2 qo'shilmasa va hujayralar ko'paysa, 4 mM (0,34 g / L) suvsiz natriy bikarbonat ishlatilishi mumkin.Shu bilan birga, bu vaqtda madaniyat kolbasining qopqog'ini mahkamlash kerak.Agar madaniyat tizimiga 5% yoki 10% CO2 kerak bo'lsa, dastlabki pH qiymati taxminan 7,6 bo'lgan 37 ° C da mos ravishda 23,5 mM (1,97 g / L) yoki 47 mM (3,95 g / L) natriy bikarbonatdan foydalaning.Bunday sharoitda gaz muvozanatini saqlash uchun kolbani qopqoqsiz qoldirish yoki Petri idishidan foydalanish kerak.

6. Nima uchun ba'zi hujayralarga natriy piruvat kerak?Muhitga qancha natriy piruvat qo'shishim kerak?

Piruvat glikolitik yo'ldagi organik kislota metaboliti bo'lib, hujayra ichiga osongina kiradi va uni tark etadi.Shuning uchun, natriy piruvatning muhitga qo'shilishi anabolizm uchun ham energiya manbai, ham uglerod manbai bo'lib, ma'lum hujayralarni saqlashga yordam beradi, hujayra klonlanishiga yordam beradi yoki muhitda sarum konsentratsiyasi kamayganda kerak bo'ladi.Natriy piruvat ham flüoresansdan kelib chiqqan sitotoksiklikni kamaytirishga yordam beradi.Natriy piruvat odatda 1 mM yakuniy konsentratsiyada qo'shiladi.Savdoda mavjud bo'lgan natriy piruvat eritmalari odatda 100 mM saqlash eritmasi (100X).

www.DeepL.com/Translator orqali tarjima qilingan (bepul versiya).


Xabar vaqti: 21-iyun-2022